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细胞爬片做免疫荧光用什么封片
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我们在做免疫荧光（if）、原位杂交（fish）、凋亡检测（tunel）等实验时，都需要制备细胞爬片，而爬片质量会影响到最后的图片呈现效果以及实验数据的精准性。本期细胞学堂为大家整理了细胞爬片的制作步骤及注意事项，帮助您快速上手开展实验。
细胞爬片免疫荧光实验步骤 第一天： 1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min； 2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min； 3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）； 4.
很多人都将玻片用此处理，以使细胞与玻片结合更牢。但我在做爬片时从来没用过多聚赖氨酸，细胞贴壁仍然很好，且在做后续的免疫细胞 化学染色 、tunel等凋亡检测、免疫荧光等也从未脱过片。 细胞爬片的操作. 1.胰酶消化细胞后计数重悬细胞于 完全培养基 中。
4、细胞爬片封片. 封片前根据实验需求决定是否需要孵育抗体或复染核。孵育好后用pbs浸洗 3次 ，用吸水纸吸干爬片上的液体，封片液封片。 注意事项. 固定好的细胞爬片建议尽快用于实验，以免影响实验效果。 取爬片时注意控制力度，夹取时尽量夹取爬片边缘 ...
封片： • 用pbs洗涤3次，每次5分钟。 • 爬片稍甩干后，将有细胞的一面朝下，用抗荧光淬灭封片剂将玻片封固在载玻片上。 9. 镜检拍照： • 切片于荧光显微镜下或共聚焦下观察并采集图像。 • 根据不同的荧光素选择适当的激发波长和发射波长。
滴加 DAPI（200/100/50 μl/孔）避光孵育 5 min，PBS 润洗 4 次，每次 5 min，洗去多余的 DAPI。用滤纸吸干爬片上的液体，滴 1 滴抗荧光猝灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，避免气泡，使细胞接触封片液，荧光显微镜观察绿色荧光。
免疫荧光原理及应用免疫荧光（Immunofluorescence，IF）是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一种强大的技术，主要原理是利用荧光标记的抗体作为探针对组织或细胞内特定抗原进行定位和定性分析。 …
免疫荧光（Immunofluorescence ... 先将洁净的盖玻片在70%乙醇中进行浸泡处理，然后用干净无菌的镊子放置到培养皿中，用无菌 PBS洗去残留的乙醇。待细胞接近长成单层后取出盖玻片，操作小心，防止细胞脱片。 ...
用 1% BSA、22.52 mg/mL 甘氨酸的 PBST (PBS + 0.1% Tween 20) 孵育细胞 30 分钟，封闭抗体的非特异性结合（可替代的封闭液包括 1% 明胶或来源于产生二抗的物种的 10% 血清：查看抗体数据表了解相关建议）。
单位实验室做过，小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安生物公司买的，实验效果不错. 细胞免疫荧光步骤： 1.细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗 ...