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RNA dot blot实验流程
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一、实验材料1,RNA待测样本(注:本人用的是直接提取的RNA,为了实验更严谨,应当先进行mRNA纯化) 2,无酶水 3,TBST(1×TBS, .1%Tween-20) 4,封闭液 5,一抗 6,二抗 7,ECL显影液 8,亚甲蓝染色缓冲液(0…
一、RNA乙酰化 Dot Blot 实操步骤. 1、实验准备. 仪器准备:超微量核酸分析仪、紫外交联仪、水平脱色摇床、化学发光仪、超净工作台、微量移液器、电热恒温鼓风干燥箱、-80℃超低温冰箱、移液器、台式高速冷冻离心机、反渗透超纯水机、立式圆形压力蒸汽灭菌锅
RNA dot blot is a technique similar to northern blotting; however, RNA samples are not separated by electrophoresis. Instead, they are spotted onto a membrane. Stage 1 - Procedure Materials required. Reagents. RNA sample; RNase-free water; TBST (1x TBS, 0.1% Tween-20) Blocking solution (AdvanBlock-Chemi Blocking solution (R-03726-E10, Advansta))
取2μl RNA样品按顺序滴在NC膜上,注意枪头不要碰膜,样品应在膜上自然扩散,每次加样都需要更换枪头。 5.室温下静置带NC膜稍晾干后,转到37℃烘箱孵育30min. 6.加入适量TBST清洗膜5min,洗去未结合的RNA. 7.弃去TBST,加入适量封闭液,室温摇动孵育1小时。 8.
如样本为DNA/RNA Oligo,则用移液器吸取10μM DNA/RNA Oligo稀释液2ul点在膜上 1cm×1cm正方形小格中心,即每小格DNA/RNA Oligo包被量为100μM(包被量根据需求调 整)。点样完成后,将NC膜放入37℃烘箱中30min,再用紫外交联20min。 4、封闭
将RNA印迹技术称为 Northern Blotting; 将蛋白质印迹技术称为 Western Blotting , 将不经凝胶的印迹技术称为斑点印迹( Dot Blotting)。 蛋白质印迹技术(Western Blotting)从发明以来已有40余年,至今为止依然是"最传统"且"应用最广"的一种蛋白质表达水平检测技术 ...
在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后与m6A或Ac4C抗体(Western blot)杂交后检测,步骤如下:交联:在65℃下5分钟,使mRNA变性以破坏RNA中的二级结构。变性后立即在冰上冷却,以防止mRNA的二级结构重新形成。
普拉特泽生物病理实验平台长期为大家提供 Dot Blot实验代做外包服务,本文跟大家分享 Dot Blot实验方法以及操作步骤: 下面是Dot Blot实验的操作步骤: 1. 制备膜:选择合适的膜,并根据实验要求进行处理,常用的有氮化纤维素(NC)膜、聚乙烯哈什表(PEI)膜等 ...
3、变性后的 rna 可放在 4 ℃ 冰箱,一个星期内做完实验即可。 4、在硝酸纤维素膜上点样时,要用水性笔在膜上做好标记,以免记错顺序。 5、点样时,速度要快,要用无 rna 酶的枪头进行点样,每个样品需要更换枪头。
RNA dot blot实验流程实验材料包括:1. RNA待测样本2. 无酶水3. TBST(1×TBS, .1%Tween-20)4. 封闭液5. 一抗6. 二抗7. ECL显影液8. 亚甲蓝染色缓冲液实验设备包括:无酶EP管加热设备NC膜 或 带正电荷的尼龙膜(